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3010704506
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通過實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)深入了解細(xì)胞
發(fā)布時(shí)間：
2022-08-26
概要：
通過實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)采用差速離心法實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種成分的分離，從而了解細(xì)胞核以及線粒體并進(jìn)行鑒定。
分離純化的方法：
根據(jù)細(xì)胞器的大小、形狀、密度等物理特性差異，離心成為亞細(xì)胞組分分離過程中最廣泛應(yīng)用的技術(shù)。
離心是利用旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進(jìn)行分離、濃縮和提純的一種方法。
主要包括差速離心、密度梯度離心等方法。
密度梯度離心：
·當(dāng)顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定離心力作用下，
顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。
·兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度，離心時(shí)，線粒體和比它沉降系數(shù)小的細(xì)胞組分聚集到梯度交界處，而沉降系數(shù)較大的細(xì)胞組分沉到離心管底部。
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟：
動(dòng)物肝細(xì)胞勻漿制備:
(1)取出肝臟（2g左右），先用清水沖洗干凈后，放在置于冰塊上的培養(yǎng)皿中用剪刀剪成小塊，去除結(jié)締組織，用生理鹽水反復(fù)洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。
(2)加入10mL預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液(⑶將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機(jī)中進(jìn)行搗碎，直至沒有可見的組織塊為止。
(4)將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中，實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)。
用差速離心法分離細(xì)胞勻漿中的各種細(xì)胞組分：
常用介質(zhì)(高溶解性的惰性物質(zhì)):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。
整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中除了按規(guī)定操作外，要格外注意離心機(jī)的使用安全，另外盡可能先充分剪碎肝組織，縮短勻漿時(shí)間，整個(gè)分離過程不宜過長，以保持組分生理活性。
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